教程：Bradford法用标准曲线测定蛋白浓度

本教程对应“Easy Regression”

 

1. reagents:

Bradford stain(考马斯亮蓝G250染液配方):

• Coomassie brilliant blue G250: 100mg
• 95% ethanol: 50ml
• phosphate acid: 100ml
• add water to 1000ml

BSA: 1ug/ul

2. procedures:

• 在96孔板中加入试剂，如下表所示：

   

  standard protein concentration(ug/ul)	repeate well 1	repeate well 2	repeate well 3
  0	200+10+0	200+10+0	200+10+0
  0.2	200+8+2	200+8+2	200+8+2
  0.4	200+6+4	200+6+4	200+6+4
  0.6	200+4+6	200+4+6	200+4+6
  0.8	200+2+8	200+2+8	200+2+8
  1.0	200+0+10	200+0+10	200+0+10
  sample1	200+10(s)	200+10(s)	200+10(s)
  sample2	200+10(s)	200+10(s)	200+10(s)

• 在96孔板各个孔中加入200ul Bradford 染液
• 然后在各个复孔中加入10,8,6,4,2,0ul的PBS或者水
• 然后对应孔中分别加入 0ul, 2ul, 4ul, 6ul, 8ul, 10ul of BSA
• 反应 5min, 在多功能读板机(e.g.Molecular Device M5)或者酶标仪上读取 OD595 值， 按下面的方式将数据拷贝到“Easy Regression”页面中
• (注意，一行代表一个浓度，不同复孔的读数）

  for starndards:

  0.6112 0.6003 0.6024
  0.7354 0.7645 0.7325
  0.8501 0.8845 0.8934
  1.0027 1.0164 1.0116
  1.1265 1.1089 1.13
  1.181 1.1962 1.212
  

  for samples:

  1.0572 1.0381 1.0169
  0.9473 0.9473 0.9473

  
  

open the protein concentration app page: >>tools> easy concentration,

paste the stardard and sample OD value,then submit, the concentration will be calculated.